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        生物資訊

        干貨!細胞凍存和復蘇常見問題

        作者:bitebo 來源:本站 發布時間: 2017-08-11 17:35  瀏覽次數:
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        細胞養著養著就要放長假了,怎么辦?

        細胞傳代多了,目前用不了這么多,又不能扔,怎么辦?

        那么,很多時候,我們需要把細胞冷凍起來,以便于長期保存,以備不時之需。而復蘇,就是再次需要細胞的時候,把冷凍的細胞蘇醒過來,恢復活力。

         

        凍存細胞一般常用胎牛血清(FBS)和二甲基亞砜(DMSO)。血清是維持細胞生存環境;DMSO是冷凍保護劑,使細胞免受低溫冰晶形成、及滲透壓改變而導致的物理損傷;

        細胞培養書上基本上建議的是兩種:70%培養基 + 10%DMSO+ 20%胎牛血清或者10%DMSO+ 90%胎牛血清 。

        但經過有些實驗室經過對比發現:"10%的DMSO,90%的血清"復蘇效果相對比"70%培養基 + 10%DMSO+ 20%血清"好。

        MP Biomedicals二甲基亞砜(DMSO)可用于細胞、組織和器官的冷凍保護劑,保護細胞免受冰晶引起的機械性損傷;可用于原代、傳代培養的細胞,重組細胞,雜交瘤細胞,胚胎干細胞、造血干細胞的凍存。(貨號:0219605590,規格:500mL

         

         

        那么凍存和復蘇細胞需要注意什么呢?且往下看!

         

         

         

        一 細胞本身狀態

        一般情況下細胞的復蘇還與原代細胞的活性有關,如果要凍存的細胞懸液本身活性不高的話,后面復蘇的存活率也不高。

         

         

         

        二 慢凍快融

        一般情況下,細胞凍存時要遵循“慢凍快融”的原則。標準的降溫速度是1-2/min ,當溫度到達-25℃,降溫速度可加快至5-10/min,到-80℃可直接入液氮。有些實驗室是梯度凍存:4度,-20,-80,液氮,依次凍存。而復蘇速度越快越好。從液氮罐里取出來之后,迅速放在37°C水浴中,盡快融化。

         

         

         

        三 安全第一

        凡是和液氮接觸的操作,注意戴保護眼鏡和手套。注意:復蘇的時候,在水浴中搖搖動的時候會有爆炸的可能性。另外, DMSO是有毒致癌的。接觸的時候一務必要帶好手套。

         

         

         

        四 DMSO是否要去除

        上面提到了DMSO是一種有毒致癌物質。那么,解凍之后,應不應該去除凍存液中的DMSO呢?答案是no。除了極少數特別注明的對DMSO敏感的細胞外,99%的細胞都不需要去除DMSO。后面細胞培養中頻繁換液會慢慢去除掉DMSO。

         

         

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